在生物制药领域，双特异性抗体（BsAbs简称“双抗”）就像冉冉升起的新星，吸引着众多科研人员和企业的目光。它能同时结合两种不同的抗原或表位，在疾病治疗中展现出独特优势，比如精准靶向肿瘤细胞、减少副作用等，因此成为当下研究和开发的热点。

然而，双抗的结构就像一个复杂的拼图，由四条不同的多肽链组成。在生产过程中，这四条链很难做到“步调一致” 地表达，这就容易产生各种 “小麻烦”，比如错配产物、片段和聚集体等杂质。其中，聚集体是最常见的 “捣乱分子”，它不仅会降低双抗的纯度和生物学活性，还可能影响其在临床上的效果，甚至对患者安全构成潜在威胁。所以，如何高效去除聚集体，成为双抗纯化工艺中亟待解决的关键问题。

双抗纯化就像一场精心设计的 “闯关游戏”，需要经过多个关键步骤（如图 1），每个步骤都有其独特的任务，共同守护双抗的质量。而且，不同结构的双抗就像不同性格的 “选手”，需要定制专属的纯化策略，才能在保证质量的同时，提高产量，让最终产品既安全又有效。

图1. bsAb下游纯化流程

传统单抗的纯化中，Protein A 层析介质是常用的 “得力助手”，但在双抗面前却有点 “力不从心”。这是因为双抗通常有更多的抗原结合位点，结构更复杂、体积更大，而传统琼脂糖 Protein A 层析介质的孔径较小，就像狭窄的通道，双抗分子很难顺利 “钻进去” 与配基结合，导致结合载量低，纯化效率也大打折扣。

图2. 不同类型抗体水合半径及层析介质孔径对比

纳微科技不仅拥有成熟的NMab系列琼脂糖基质Protein A层析介质，以其优异的高载量性能广泛应用于常规单抗、双抗的纯化；更凭借多年在微球制备和下游纯化领域的深厚经验，创新开发了具有超大孔径的UniMab系列介质，其开放的大孔径设计，让复杂结构的双抗能够轻松进入介质内部，与配基充分接触，大大提升了结合载量和纯化效率。从图 3 的对比数据中可以清晰看到，UniMab 50HC 对不同类型双抗的载量明显高于某进口产品。

图3. 不同亲和层析介质对不同类型双抗的载量对比

案例1. UniMab 50HC亲和纯化某双抗

在实际应用中，聚集体和片段因含有 Fc 结构，会与 Protein A 层析介质“粘在一起”，无法在上样阶段直接流穿去除 。这时，可利用它们与 UniMab 50HC 结合能力不同的特点，优化中间淋洗条件与 pH 等度洗脱流程。以 UniMab 50HC 亲和纯化某双抗为例（图 4）：先在 pH 5.5 时，让半抗及片段“赶走”；接着在 pH 5.0 时，收集目标 bsAb 单体；其余聚集体及片段则留在柱子上，最后用pH 4.5 的缓冲液将它们“冲下来”，最终获得高纯度的 bsAb。

图4.UniMab 50HC亲和纯化某双抗

离子交换层析介质就像一个“电荷分拣机”，利用bsAb与聚集体等电点差异，有效去除双抗聚集体。由于bsAb与聚集体表面电荷分布或密度的不同，通过阳离子或阴离子交换介质的静电作用实现分离。通过优化缓冲液 pH、盐梯度及上样条件，可高效提升双抗纯度。

不同类型双抗分子的物理化学特性存在显著差异，如分子大小、电荷分布等。为精准应对这类差异化需求，纳微科技依托先进微球研发平台，开发出三大系列离子交换层析介质：NanoGel 系列、UniGel 系列及 NW Rose Plus 系列，适配不同类型的双抗纯化。

案例2. NanoGel-50SP HP阳离子交换纯化某双抗

在某双抗项目中，聚集体杂质含量高，经多轮筛选，采用 NanoGel-50SP HP 层析介质优化工艺。它凭借高选择性基材和大孔结构，根据分子电荷特性与空间位阻差异，精准分离产品相关杂质。优化层析缓冲液 pH 值与洗脱条件，有效去除双抗聚集体（图5）。

图5. NanoGel-50SP HP阳离子交换纯化某双抗

bsAbs的结构复杂性导致其生产过程中易混入聚集体杂质，而传统离子交换层析技术因分离机制单一，难以实现此类杂质的高效去除 [2]。

在此背景下，混合模式层析技术凭借其多机制协同作用的优势，成为优化 bsAbs 纯化流程的关键解决方案。

混合模式层析就像一个 “超级联盟”，整合了离子交换、疏水相互作用、金属螯合等多重分离机制，显著提升了对结构相似分子的分辨能力。纳微科技推荐的bsAbs 纯化的复合模式层析介质主要包括两类：

案例3. 羟基磷灰石NMCHT Type II纯化某双抗

以羟基磷灰石 NMCHT Type II 为例，它的表面分布着 Ca²⁺（C 位，金属亲和作用位点）和 PO₄³⁻（P 位，阳离子作用位点），可通过静电、金属亲和等多重相互作用与抗体分子结合。

纳微科技NMCHT Type II 作为羟基磷灰石复合模式层析介质，具有超大孔径，能精准去除双抗聚集体、片段等杂质。在某双抗项目中，一步纯化，纯度从98.2%提升至99.7%，具有显著去除二聚的效果，收率75%左右（图6）。

图6. NMCHT Type II纯化某双抗

在双抗药物聚集体控制的 “战役” 中，Protein A 亲和层析、离子交换层析和复合模式层析组成了 “黄金战队”：

通过 2 步或 3 步纯化的 “组合拳”，能够显著降低聚集体含量，为双抗药物的质量保驾护航。以下是双抗去聚集体的推荐填料及特色，为不同需求的双抗纯化提供了丰富的选择。

双抗去聚集体推荐填料

随着生物制药技术的不断发展，双抗纯化工艺也在持续创新和优化。相信在这些先进技术和产品的助力下，双抗药物将在更多疾病治疗领域发挥重要作用，为患者带来更多希望。